概述

法醫(yī)DNA案件分析實(shí)驗(yàn)室常常遇到一定比例的富有挑戰(zhàn)性的樣品，很難成功檢測(cè)。而且，近年來(lái)送檢進(jìn)行DNA分析的樣品大大擴(kuò)展，覆蓋更廣的案件類型，包括侵財(cái)案件和輕微犯罪案件。因此，現(xiàn)在法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室必須處理更多的樣品，而這些樣品往往被一種或多種復(fù)雜因素所困擾（例如微量DNA、降解、新的或不熟悉的PCR抑制劑、以上兩個(gè)或更多的因素）。所有這些頗具挑戰(zhàn)性的情況會(huì)顯著影響分析人員獲得可信DNA圖譜的能力。許多實(shí)驗(yàn)室為了從困難樣品中獲得更好的結(jié)果，盡量?jī)?yōu)化他們的工作流程。這些優(yōu)化的方法包括對(duì)樣品進(jìn)行稀釋或純化，在反應(yīng)中加更多的酶，或者進(jìn)行毛細(xì)管電泳條件的優(yōu)化。成熟的磁珠提取方法的出現(xiàn)，比如PrepFiler?法醫(yī)DNA提取試劑盒，幫助提高了從法醫(yī)檢材中提取的DNA數(shù)量和質(zhì)量，從而提高了下游結(jié)果的質(zhì)量。盡管已經(jīng)獲得了顯著進(jìn)步，但實(shí)驗(yàn)室還是需要更多的工具，來(lái)應(yīng)對(duì)不斷擴(kuò)張的復(fù)雜DNA樣本。AmpFlSTR? Identifiler? Plus PCR擴(kuò)增試劑盒是特地為滿足法醫(yī)分析實(shí)驗(yàn)室的需要而開(kāi)發(fā)的。Identifiler? Plus試劑盒采用與廣泛使用的Identifiler?試劑盒相同的引物，利用新一代PCR擴(kuò)增技術(shù)來(lái)獲得全新水平的性能、數(shù)據(jù)質(zhì)量和效率。這幫助法醫(yī)分析人員更有信心地從富有挑戰(zhàn)性的樣品中得到更多信息。

提高對(duì)含抑制劑樣本的分析性能I d e n t i f i l e r ? P l u s 試劑盒對(duì)近期AmpFlSTR? 試劑盒（如MiniFiler?試劑盒）開(kāi)發(fā)時(shí)所定的緩沖液配方進(jìn)行了改進(jìn)，目的是克服高水平的PCR抑制，并確保更穩(wěn)定更高效的擴(kuò)增。新的配方能從目前Identifiler?試劑盒無(wú)法分析的樣本中獲得結(jié)果（圖1）。靈敏度更高Identifiler? Plus試劑盒中的緩沖液和預(yù)混合液的改良可促進(jìn)更穩(wěn)定的擴(kuò)增 —— 即使是那些不含PCR抑制劑的樣品也一樣。在無(wú)需增加PCR循環(huán)數(shù)或進(jìn)樣次數(shù)的情況下，經(jīng)過(guò)Identifiler? Plus試劑盒擴(kuò)增的純化樣品所產(chǎn)生的峰高比用目前的Identifiler?試劑盒提高了40-100%（圖2）。此外，兩種不同循環(huán)數(shù)的步驟（28和29）的驗(yàn)證讓實(shí)驗(yàn)室可以調(diào)整適應(yīng)常規(guī)DNA模板量樣本和微量DNA樣本。改善對(duì)混合物的分析性能Identifiler? Plus試劑盒的性能改善大大簡(jiǎn)化了對(duì)混合物案件樣品的分析 —— 這些混合物中常含有PCR抑制劑，其中次要成分可能以極低的水平存在。Identifiler? Plus試劑盒具有更高的靈敏度，更好的克服PCR抑制的能力，同時(shí)雜合子的峰高均衡性和熒光顏色之間的平衡性也更好，使得分析人員能夠比以往更輕松更可靠地分析和解釋混合物樣本（圖3）。更干凈的基線Applied Biosystems對(duì)引物生產(chǎn)工藝進(jìn)行了重大改進(jìn)，并將這些改進(jìn)融入Identifiler?Plus試劑盒中。這些改進(jìn)生產(chǎn)出更純的引物，減少染料峰的產(chǎn)生，從而有助于得到更干凈的基線。這個(gè)特征讓分析人員能夠用最大的自信和效率來(lái)闡釋結(jié)果，包括那些從困難混合物中獲得的結(jié)果。其它改進(jìn)和優(yōu)勢(shì)試劑盒配方的改進(jìn)還實(shí)現(xiàn)了更快速的擴(kuò)增 —— 與目前的Identifiler?試劑盒相比，擴(kuò)增步驟大約可節(jié)省1個(gè)小時(shí)。此外，Identifiler? Plus預(yù)混合液中含有AmpliTaqGold? DNA聚合酶，從試劑盒包裝上節(jié)省了2支試劑管和一個(gè)多余的包裝小盒，簡(jiǎn)化了反應(yīng)制備。Identifiler? Plus試劑盒中所包含的配方改進(jìn)，均不需要對(duì)原Identifiler?試劑盒的等位基因ladder或5種染料配置進(jìn)行修改。這種配置可實(shí)現(xiàn)最佳的基因座間隔，且擴(kuò)增子的大小范圍不超過(guò)360 bp，與其他擴(kuò)增子大小范圍明顯大得多的多重分析系統(tǒng)相比，能夠從降解的樣品中更好地獲得數(shù)據(jù)。對(duì)于嚴(yán)重降解的樣品，可采用專門設(shè)計(jì)的MiniFiler?試劑盒與Identifiler?Plus試劑盒聯(lián)合使用，利用miniSTR技術(shù)來(lái)幫助得到更多信息。此外，Identifiler? Plus試劑盒維持了原引物序列，確保與過(guò)去用Identifiler?、Identifiler? Direct、Profiler Plus?、Cofiler?或SGM Plus?試劑盒分型的樣品保持基因分型一致性，并保證了與現(xiàn)有DNA數(shù)據(jù)庫(kù)

進(jìn)行比對(duì)。